1、细胞培养基础知识手册掌握基本的细胞培养技术，取得一致的实验结果携手共进本文档中的信息如有更改，恕不另行通知。免责声明THERMO FISHER SCIENTIFIC和/或其附属公司不对本文档提供任何明示或暗示的保证，包括但不限于适销性、特定用途适用性或非侵权性的保证。在任何情况下，无论是否以合同、侵权、担保，抑或任何法规为依据，或以任何其他特殊依据为基础，对与本文档有关或因本文档引起的（包括但不限于对本文件的使用）特殊、偶然、间接、惩罚性、多重或后果性的损害，在法律允许范围内，LIFE TECHNOLOGIES和/或其附属公司均不承担责任。2020 Thermo Fisher Scientif

2、c Inc.保留所有权利。COL011985 0820目录细胞培养基础知识|iii仅供教学使用。1.引言 .1手册目的 .1细胞培养简介 .2什么是细胞培养？.2有限细胞系与连续细胞系.2培养条件.2冷冻保存.3培养细胞的形态.3细胞培养的应用.32.细胞培养实验室 .4安全 .4生物安全等级.4SDS.5安全设备.5个人防护装备（PPE）.5安全设备.5细胞培养设备 .6基本设备.6扩展设备.7其他用品.7细胞培养实验室 .7无菌工作区.7细胞培养罩.7细胞培养通风橱布局.9培养箱.10储存.10冻存.11细胞计数器.11无菌技术 .12简介.12无菌工作区.12良好的个人卫生.12无菌试剂

3、和培养基.12无菌操作.13无菌技术检查清单 .14iv|细胞培养基础知识仅供教学使用。生物污染 .15简介.15细菌.15酵母.16霉菌.16病毒.17支原体.17交叉污染.18使用抗生素.183.细胞培养基本知识.19细胞系.19选择合适的细胞系.19获取细胞系.20培养环境 .20贴壁培养与悬浮培养.20培养基.21血清.22细胞培养塑料耗材.23pH值.25CO2.25温度.25细胞形态学.26哺乳动物细胞.26哺乳动物细胞形态差异.26293细胞形态.27昆虫细胞 .28Sf21细胞形态.28Sf9细胞形态.294.细胞培养方法.30培养细胞的维持指南 .30什么是传代培养？.30何

4、时进行传代培养.31推荐用于普通细胞系的培养基.32TrypLE解离酶.34细胞培养基础知识|v仅供教学使用。贴壁细胞传代.35所需材料.35贴壁细胞的传代方案.35昆虫贴壁细胞传代注意事项.37悬浮细胞传代.38悬浮培养传代.38悬浮培养容器.38悬浮培养传代.39悬浮细胞的传代方案.39悬浮昆虫细胞传代注意事项.41冷冻细胞 .42冷冻保存.42冷冻保存指南.42冻存培养基.43所需材料.44培养细胞冻存方案.44解冻冻存细胞.45解冻指南.45所需材料.46解冻冻存细胞.465.转染基础知识.47转染简介 .47什么是转染？.47术语.47应用.48转染类型 .49瞬时转染.49稳定转染

5、.50选择转染策略.51基因输送技术.53阳离子脂质体介导的输送.54磷酸钙共沉淀.56DEAE-右旋糖酐介导的输送.57其他阳离子聚合物输送.58病毒输送.59电穿孔.61其他物理输送方法.62 阳离子脂质体介导的转染.63机理.63阳离子脂质体转染试剂.64病毒介导的基因转移 .66病毒载体的主要特点.66常见病毒载体.67Neon转染系统.69稳定转染子的选择.71用于真核细胞的选择性抗生素.71报告基因分析.73转染分析.73基因调控分析.73常用的报告基因.74RNAi和非编码RNA研究.75常用RNAi术语表.75RNAi的工作原理.76siRNA分析.76miRNA分析.77选择

6、RNAi方法.786.转染方法.79转染效率的影响因素 .79细胞类型.79细胞健康与活性.80汇合.81培养基.81血清.82抗生素.82转染分子的类型.83转染方法.83转染方法的选择（非病毒）.84连续细胞系.84原代细胞与有限培养.85病毒DNA输送系统的选择.86哺乳动物细胞表达.86 vi|细胞培养基础知识仅供教学使用。质粒DNA转染指南.87载体考虑因素.87质粒DNA的质量.87基因产物和启动子.88对照.88质粒DNA转染的优化.89磷酸钙-DNA共沉淀法需考虑的因素.89阳离子脂质体转染需考虑的因素.90电穿孔法的考虑因素.93稳定转染子的筛选.94开始前.94杀死曲线.9